penjujukan DNA
Dalam penjujukan DNA, kaedah biokimia digunakan untuk menentukan urutan nukleotida (molekul asas DNA dengan gula dan fosfat) dalam molekul DNA. Kaedah yang paling banyak digunakan adalah kaedah penamatan rantai Sanger. Oleh kerana DNA terdiri daripada empat asas yang berbeza, empat pendekatan yang berbeza dibuat.
Setiap pendekatan mengandungi DNA yang akan disusun, primer (molekul permulaan untuk penjujukan), DNA polimerase (enzim yang memperluas DNA) dan campuran keempat-empat nukleotida yang diperlukan. Walau bagaimanapun, dalam setiap empat pendekatan ini asas yang berbeza diubah secara kimia sedemikian rupa sehingga dapat digabungkan tetapi tidak memberikan titik tindakan untuk polimerase DNA. Ini kemudian membawa kepada penamatan rantaian. Kaedah ini menghasilkan serpihan DNA dengan panjang yang berbeza-beza, yang kemudian dipisahkan secara kimia oleh elektroforesis gel yang disebut mengikut panjangnya. Penyortiran yang dihasilkan dapat diterjemahkan ke dalam urutan nukleotida di bahagian DNA yang diuraikan dengan melabelkan setiap basa dengan warna pendarfluor yang berbeza.
Hibridisasi DNA
Hibridisasi DNA adalah kaedah genetik molekul yang digunakan untuk membuktikan kesamaan antara dua helai DNA asal yang berbeza. Kaedah ini memanfaatkan fakta bahawa sehelai helai ganda DNA terdiri daripada dua helai tunggal pelengkap. Semakin serupa kedua helai tunggal antara satu sama lain, semakin banyak asas membentuk sambungan pepejal (ikatan hidrogen) dengan asas yang berlawanan atau semakin banyak pasangan asas terbentuk.
Tidak ada pasangan asas yang akan berlaku antara bahagian pada dua helai DNA yang mempunyai urutan asas yang berbeza. Bilangan sebatian relatif kini dapat ditentukan dengan menentukan titik lebur di mana helai ganda DNA yang baru terbentuk dipisahkan. Semakin tinggi takat lebur, semakin banyak asas yang saling melengkapi membentuk ikatan hidrogen antara satu sama lain dan semakin serupa kedua-dua helai tunggal. Kaedah ini juga boleh digunakan untuk mengesan urutan asas tertentu dalam campuran DNA. Untuk tujuan ini, serpihan DNA yang dibentuk secara buatan dapat diberi label dengan pewarna (pendarfluor). Ini kemudian berfungsi untuk menandakan urutan asas yang sesuai dan dengan demikian dapat menjadikannya kelihatan.
Semua artikel dalam siri ini:
