Pengesanan struktur tisu, antibodi, dan patogen dengan pelabelan imun adalah popular, moden dan tepat. Immunofluorescence merujuk kepada pelabelan imun dengan pendarfluor yang disediakan antibodi yang dibuat untuk bersinar di bawah cahaya UV. Dalam pengesanan imunofluoresensi langsung, substrat ujian diperiksa secara langsung dengan cahaya antibodi, tanpa antibodi primer hulu atau antigen tiruan.
Apakah pengesanan langsung imunofluoresensi?
Antigen spesifik tumor dalam tisu tumor dapat dikesan secara langsung dengan imunofluoresensi. Oleh itu, adalah mungkin untuk mengetahui di mana di dalam badan yang ada metastasis datang dari. Pengesanan langsung imunofluoresensi adalah kaedah diagnostik berdasarkan penemuan dalam imunologi, imunostaining dan imunohistokimia. Fokus di sini adalah pada kemampuan antibodi untuk mengikat ke laman web tertentu dalam tisu atau antigen dalam serum. Laman web ini adalah epitop. Dalam diagnostik biokimia, terdapat antibodi tiruan atau mimetik (tunggal: mimetik) yang memungkinkan pelabelan ikatan antibodi-antigen ini dengan pendarfluor atau radioaktiviti. Konjugat antibodi buatan sebenarnya mengikat epitop di satu pihak dan mempunyai penanda pendarfluor sekiranya berlaku imunofluoresensi. Ini adalah alternatif untuk penggunaan penanda radioaktif. Ciri khas pengesanan langsung imunofluoresensi berbanding dengan pengesanan tidak langsung adalah bahawa antibodi yang mengikat epitop antigen dalam bahan yang diperiksa pada masa yang sama sudah menjadi konjugat antibodi dengan penanda pendarfluor. Antibodi tambahan untuk interposisi tidak diperlukan untuk pengesanan langsung. Dalam imunofluoresensi, pendarfluor, yang bersinar di bawah sinar UV, dan fluorescein isothiocyanate (FITC) digunakan sebagai pewarna untuk membina konjugat antibodi tiruan. Sejauh membacanya agak rumit, tetapi pengesanan langsung imunofluoresensi adalah kaedah perubatan standard diagnostik makmal kerana pelbagai masalah perubatan. Antibodi yang mengandungi pewarna pendarfluor sedia dijual.
Fungsi, kesan, dan sasaran
Pengesan langsung imunofluoresensi tersedia untuk kajian tisu untuk mengotorkan struktur tertentu dalam tisu. Tetapi ia juga wujud untuk sel tunggal. Di situlah sitometri aliran memainkan peranan besar. Dan akhirnya, terdapat imunoassay yang terdiri daripada fasa pepejal dan cecair. Kajian imunofluoresensi tisu penting terutama dalam onkologi, iaitu rawatan perubatan kanser. Antigen spesifik tumor dalam tisu tumor dapat dikesan secara langsung dengan imunofluoresensi. Pemeriksaan sampel tisu dari tumor selalunya penting untuk mengetahui di mana terdapatnya tubuh metastasis berasal dari, atau juga untuk membuat penilaian mengenai apakah tumor itu jinak atau ganas. Pemeriksaan sel individu dengan pengesanan langsung imunofluoresensi digunakan untuk mencari antigen virus, antigen bakteria dan epitop lain. Sebagai contoh, seseorang mengetahui sama ada sel dijangkiti oleh virus dan pada tahap kitaran jangkitan sel apa. FACS (= Penyortiran Sel yang Diaktifkan dengan Fluoresensi) adalah kaedah sitometri aliran yang sangat efisien di mana sel berlabel fluoresen diedarkan ke tabung uji yang berbeza bergantung pada jenis pewarnaan. Kaedah ini penting dalam imunologi, hematologi and infektiologi. Immunofluorescence immunoassays memungkinkan pengesanan langsung toksin persekitaran, organisma yang diubahsuai secara genetik dan bahan tambahan tertentu dalam makanan. Dalam persediaan eksperimen ini, selalu ada fasa pepejal dan cecair. Banyak patogen, Termasuk AIDS-sebab virus HI, juga dapat dikesan secara langsung. Walau bagaimanapun, semasa mengesan jangkitan dan penyakit autoimun, tujuannya adalah untuk mengesan antibodi daripada antigen. Ini adalah pembelaan molekul dihasilkan oleh badan sendiri sistem imun. Pengesanan semacam itu bukan pengesanan langsung mengikut definisi yang dinyatakan di sini, kerana antibodi pendarfluor tidak berpasangan langsung dengan antigen tubuh sendiri, tetapi dengan antigen dari kumpulan ujian. Antigen ini dari kumpulan eksperimen seterusnya menghubungkan dengan antibodi endogen. Hanya dalam ujian pengesanan dan pengesahan khas adalah pengesanan langsung imunofluoresensi yang digunakan untuk jangkitan biasa, misalnya oleh HI virus and Chlamydia. Terdapat ujian untuk banyak penyakit lain. Dalam kebanyakan situasi, pengesanan antibodi tidak langsung lebih baik untuk penyakit berjangkit kerana badan sistem imun mempunyai kemampuan bijak untuk mengingat jangkitan sebelumnya. Dalam situasi lain, pengesanan antigen secara langsung dan pengesanan antibodi tidak langsung saling melengkapi. Yang terakhir menunjukkan bahawa jangkitan telah terjadi sebelumnya, sedangkan yang pertama memberikan maklumat yang lebih tepat mengenai status aktiviti patogen semasa.
Risiko, kesan sampingan, dan bahaya
Dengan pengesanan langsung imunofluoresensi, seperti semua pengesanan perubatan, terdapat dua risiko: Risiko hasil positif palsu dan risiko hasil negatif palsu. Hasil positif yang salah menyebabkan ketidakselesaan psikologi dan sangat menyedihkan pesakit. Oleh itu, prosedur ujian tambahan ditambahkan ke hasil positif, terutama ketika diagnosis membawa kepada perubahan kehidupan yang drastik. Bahaya akibat negatif palsu adalah bahawa pesakit tidak belajar tepat pada waktunya mengenai ancaman terhadap dirinya sendiri kesihatan dan mungkin juga untuk kesihatan awam. Oleh itu, ada baiknya melakukan banyak penyelidikan dan membuat sebilangan besar pengesanan langsung imunofluoresensi berbeza yang siap dijual dan menawarkannya. Bersama dengan kaedah pengesanan penyakit dan patologi langsung dan tidak langsung yang lain, ini meningkatkan ketepatan diagnosis. Pengesanan langsung berdasarkan konjugat antibodi, yang di satu pihak mengikat epitop antigen dan di sisi lain juga menyebabkan pendarfluor pada masa yang sama. Oleh itu, produk sedemikian hanya digunakan dalam satu jenis prosedur ujian dan tidak digunakan untuk jenis ujian lain. Ini adalah perbezaan prosedur yang penting dari pengesanan tidak langsung, di mana antibodi primer digunakan di hulu antibodi pendarfluor untuk pengikatan epitop. Oleh itu konjugat antibodi sesuai untuk ujian yang berbeza. Perbezaan prosedur ini berbeza dengan perbezaan perubatan antara pengesanan antibodi tidak langsung dan pengesanan antigen secara langsung.
