Secara klinikal sahaja, iaitu berdasarkan sifilis gejala, diagnosis tidak dapat dibuat, kerana simptom sifilis boleh sangat berbeza dan tidak spesifik. Oleh itu mikroskopik dan serologi sifilis ujian mesti dilakukan. Tidak mungkin menanam bakteria T. pallidum pada medium kultur. Dalam diagnosis mikroskopik sifilis ujian, smear diambil dari perubahan kulit dan membran mukus dan rembesan yang diperoleh diperiksa di bawah mikroskop medan gelap. Di bawah mikroskop cahaya biasa bakteria tidak dapat dikesan kerana terlalu kurus. Selain struktur khas, diameter kecil, gegelung sekata, lenturan cepat dan regangan pergerakan di tengah-tengah badan bakteria adalah ciri. Hasil ujian positif adalah bukti penyakit, tetapi hasil negatif tidak termasuk sifilis. Dalam diagnostik serologi ujian saringan antibodi dilakukan yang positif 2-4 minggu selepas jangkitan. Antibodi dikesan telah terbentuk melawan antigen pada permukaan patogen bakteria. Ujian TPHA (ujian hemaglutinasi T. pallidum, hari ini juga disebut ujian TPPA) adalah reaksi carian sensitif dan sangat spesifik di mana antibodi melawan T. pallidum clump (agglutinate) merah darah sel (erythrocytes) dimuatkan dengan antigen T. pallidum. Ia menjadi positif pada minggu ke-2 setelah dijangkiti sifilis dan kekal selama bertahun-tahun setelah penyakit ini sembuh ("seronar"). Pada peringkat awal awal masih boleh menjadi negatif. Ujian ini digunakan untuk kes sifilis yang disyaki, tetapi juga untuk pemeriksaan rutin di awal kehamilan, Daripada darah penderma dan pengawet darah. Keputusan positif memerlukan ujian pengesahan: Dalam ujian FTA-ABS (Uji Penyerapan Antibodi Fluoresensi Treponema) bakteria dipasang pada slaid dan dibawa bersama darah serum, bahagian darah yang cair. The antibodi dalam serum darah kemudian melekat pada antigen bakteria. Setelah membilas serum, antibodi itu kembali dilabel dengan antibodi lain yang membawa pewarna pendarfluor. Di bawah mikroskop pendarfluor, antibodi yang dicari terhadap bakteria menjadi kelihatan. Ujian FTA-ABS, seperti ujian TPPH, positif pada minggu ke-2 selepas jangkitan dan tetap positif dalam pengertian parut seron beberapa tahun selepas penyembuhan klinikal. Ujian VDRL (Ujian Makmal Penyakit Venereal), juga dikenal sebagai ujian pengiraan flokulasi kardiolipin, digunakan untuk terapi dan kemajuan pemantauan. Ujian sifilis ini digunakan untuk mengesan antibodi khusus lipid, yang surut ketika manifestasi kulit sembuh. Cardiolipin adalah antigen yang diekstrak dari jantung lembu dan terikat dengan kolesterol zarah. Zarah yang dimuat dibawa bersama dengan serum pesakit. Dalam kes positif, flokulasi (aglutinasi) berlaku. Ujian ini menjadi positif 4-6 minggu selepas jangkitan atau 1-3 minggu setelah kesan utama berlaku. Jumlah antibodi khusus lipid menurun dengan cepat apabila simptom luaran sifilis sembuh dan tidak lagi wujud setelah rawatan berjaya. Kuantiti ini (titre) dapat digunakan untuk menilai sama ada terapi berjaya atau adakah sifilis tidak dirawat dengan baik. Walau bagaimanapun, ujian VDRL juga positif bagi penyakit lain, jadi ini adalah ciri sifilis, tetapi tidak spesifik. Ujian CSF dilakukan untuk mengesahkan neurosifilis pada pesakit dengan gejala neurologi sifilis dan untuk mengesan atau mengecualikan neurosifilis asimtomatik. Hanya antibodi dalam CSF yang juga telah dihasilkan di CNS yang membuktikan neurosifilis, tetapi bukan antibodi yang telah berpindah dari serum ke CSF. Ini dapat ditentukan dengan membandingkan tajuk antibodi dalam CSF dan serum. Sekiranya nisbah titer CSF ke titer serum melebihi 2, disyaki neurosifilis. Sifilis dapat menampakkan dirinya dengan pelbagai cara, terutamanya simptom kulit boleh sangat berbeza: "Sifilis adalah monyet di antara penyakit kulit", iaitu ia boleh menipu hampir semua penyakit kulit. Kadang-kadang Roseola syphilitica keliru exanthema ubat, yang merupakan hasil daripada intoleransi dadah. Yang menyakitkan ulser molle, disebabkan oleh bakteria H. ducreyi, dan lain-lain perubahan kulit disebabkan oleh jangkitan (mis granuloma venerum) mesti dibezakan dengan ulser durum.
