Hibridisasi in situ adalah kaedah untuk mengesan penyimpangan kromosom. Ia melibatkan pelabelan khusus kromosom dengan tepung pewarna dan mengikatnya dengan probe DNA. Teknik ini digunakan untuk diagnosis pranatal mutasi genetik.
Apa itu hibridisasi in situ?
Hibridisasi in situ melibatkan pelabelan khusus kromosom dengan tepung pewarna dan mengikatnya dengan probe DNA. Teknik ini digunakan untuk diagnosis pranatal gen mutasi. Hibridisasi in situ atau pendarfluor hibridisasi in situ melibatkan pengesanan genetik molekul asid nukleik dari RNA atau DNA dalam tisu atau sel tertentu. Biasanya, jenis diagnostik ini digunakan untuk mengesan kelainan kromosom struktural atau berangka di mengandung. Untuk tujuan ini, penyelidikan yang dihasilkan secara buatan digunakan, yang terdiri daripada asid nukleik. Ia kemudian mengikat pada asid nukleik dalam organisma dengan berpasangan asas. Pengikatan ini disebut dengan istilah hibridisasi. Pengesanan dilakukan pada struktur hidup pesakit dan oleh itu sesuai dengan pengesanan in situ. Yang perlu dibezakan adalah kaedah in vitro, di mana pengesanan dilakukan di tabung uji. Kaedah ini dikembangkan pada abad ke-20 oleh saintis Joe Gall dan Mary Lou Pardue. Teknik ini telah berkembang sejak itu. Sebagai contoh, semasa probe radioaktif digunakan, probe tepung tepung dengan ikatan kovalen dengan pelabelan molekul digunakan hari ini.
Fungsi, kesan, dan sasaran
Hibridisasi in situ biasanya digunakan untuk mengesan penyimpangan kromosom, kelainan kromosom yang tidak dapat dikesan dalam karioogram. Oleh itu, kaedah ini selalu digunakan ketika penyakit keturunan akan ditentukan selama mengandung. Oleh kerana penyimpangan kromosom adalah masalah yang tidak boleh diremehkan hari ini, penerapan kaedah ini meningkat dari masa ke masa. Hibridisasi dilakukan dengan menggunakan sel asli dari ibu cecair amnion. Asas teknik ini adalah pengikatan probe berlabel warna dengan serpihan DNA. Berkat pengikatannya, mikroskop kemudian dapat digunakan untuk menilai jumlah salinan, kerana salinan masing-masing memancarkan isyarat cahaya dan dengan demikian dapat dilihat di bawah mikroskop. Terdapat prosedur yang berbeza untuk ini. Sama ada analisis berlaku sejurus selepas mengikat. Dalam kes ini, pewarna tepung seperti Biotin digunakan, yang terikat terus ke probe DNA. Dalam kaedah tidak langsung hibridisasi in situ, analisis tidak dapat dilakukan segera setelah hibridisasi kerana bahan pendarfluor dapat mengikat probe hanya setelah hibridisasi. Kaedah tidak langsung ini lebih biasa digunakan berbanding kaedah langsung kerana dianggap lebih sensitif. Teknik merangkumi probe DNA sentrometer khusus kromosom, probe DNA khusus lokus, prob perpustakaan DNA khusus kromosom, dan hibridisasi genom perbandingan. Probe DNA sentromere khusus kromosom dapat digunakan untuk mengesan kelainan berangka kromosom. Iaitu, ia digunakan terutamanya ketika digandakan atau dihapus kromosom disyaki. Probe DNA khusus lokus sangat sesuai untuk pengesanan mutasi minimum yang tidak dapat dikesan dalam karyogram. Probe perpustakaan DNA khusus kromosom digunakan khususnya untuk mengesan penyisipan dan translokasi. Hibridisasi genom perbandingan, sebaliknya, adalah analisis komprehensif mengenai kerugian dan keuntungan bahan kromosom. Hari ini, hibridisasi in situ sangat penting dalam diagnostik pelbagai mutasi kromosom. Dalam diagnostik Sindrom Down, sebagai contoh, probe mengikat kromosom 21. Untuk tujuan ini, probe khusus kromosom biasanya digunakan, yang dapat digunakan jika terdapat kecurigaan penyakit ini. Kecurigaan mungkin timbul, misalnya, jika ibu bapa sebelumnya telah melahirkan anak yang menghidap penyakit tersebut dan penyakit tersebut ultrasound gambar jelas. Sekiranya terdapat triple daripada double tie, yang menghasilkan isyarat warna tiga kali ganda, diagnosis dianggap disahkan.
Risiko, kesan sampingan, dan bahaya
Tidak seperti PCR, misalnya, hibridisasi in situ jauh lebih mudah terdedah kepada pencemaran. Di samping itu, masa yang diperlukan untuk prosedur ini jauh lebih sedikit. Walau bagaimanapun, kerana embrio khususnya membentuk corak kromosom, setiap corak yang ada tidak dapat digunakan untuk menyimpulkan kepastian kromosom yang selebihnya. pengedaran dan dengan itu status genetik sel lain. Isyarat warna juga mungkin bertindih atau tetap tidak dapat dilihat dengan alasan lain. Oleh itu, hibridisasi in situ sebagai alat diagnostik selama mengandung agak terdedah kepada kesalahan. Salah diagnosis boleh berlaku dan ibu bapa boleh membuat keputusan untuk tidak sihat embrio. Untuk mengurangkan keseragaman hibridisasi in situ, sekurang-kurangnya dua sel embrio harus diperiksa secara serentak. Dengan memeriksa dua sel secara selari, kini hanya terdapat risiko salah diagnosis. Oleh itu, ibu bapa boleh bergantung pada diagnosis dalam kes seperti itu. Hibridisasi in situ tidak ditawarkan kepada setiap wanita hamil, tetapi hanya untuk wanita dari kumpulan risiko. Walaupun begitu, wanita hamil tidak dinafikan diagnosis jenis ini atas permintaan mereka sendiri. Tidak normal ultrasound penemuan atau serum yang tidak normal boleh mendorong doktor untuk menawarkan prosedur diagnostik. Hari ini, hibridisasi in situ dapat digunakan untuk mendiagnosis penyimpangan kromosom yang banyak, tetapi tidak semuanya. Oleh itu, hibridisasi in situ tidak boleh dilakukan secara bersendirian, tetapi mesti selalu digunakan bersamaan dengan ujian kromosom konvensional. Penjagaan wanita hamil memainkan peranan utama dalam prosedur ini. Oleh itu, sebelum analisis, perbincangan menyeluruh mengenai kaedah diagnostik dilakukan dengan ibu hamil, yang memberitahunya mengenai risiko, kemungkinan, dan batasan teknik.
